פּראָדוקציע און ביאָכעמישע כאַראַקטעריזאַציע פון ​​​​אויסטער שוואָם לאַקאַסע NRC 620 און עוואַלואַציע פון ​​​​זייַן עפעקטיווקייַט אין עפּל זאַפט קלעריפיקאַטיאָן.

נאך 25 טעג פון סטאטישער אינקובאציע ביי 28°C, האט לאַקאַסע פון ​​*Pleurotus ostreatus* NRC620 געוויזן די העכסטע טעטיקייט אין דעם פונגאַל קולטור מעדיום. די אָפּטימאַלע pH און טעמפּעראַטור ווערטן פֿאַר דעם ענזיים זענען געווען 3.0 און 70°C, ריספּעקטיוולי. נאך 2 שעה פון אינקובאציע ביי 40°C און 50°C, האט די ענזיים טעטיקייט זיך פארהאלטן 68.33% און 59.61%, ריספּעקטיוולי. נאך 2 שעה פון אינקובאציע אין ציטראַט-פאָספאַט באַפער (pH 7.0), איז די ענזיים טעטיקייט געבליבן ביי 100%. די צוגאב פון 10 mM MgSO₄ און CuSO₄ האט פארגרעסערט די ענזיים טעטיקייט מיט בערך 21% און 35%, ריספּעקטיוולי, בשעת NaCl, MnCl₂, KCl, און CaCl₂ האבן געשטערט די ענזיים טעטיקייט. ניצנדיק ABTS אלס א סובסטראט, זענען די קינעטישע פאראמעטערס (Km און Vmax) פון *Pleurotus ostreatus* NRC 620 לאַקאַסע געווען 1.99 mM און 16,217 μmol min−1 L−1, בהתאמה. ענזימאַטישע באַהאַנדלונג פון עפּל זאַפט מוסטערן האט באַדייטנד רעדוצירט ביידע pH און וויסקאָסיטי, און די רעדוקציע האט קאָרעלירט מיט אַ פאַרגרעסערונג אין סטאָרידזש צייט. לאַקאַסע באַהאַנדלונג האט רעזולטירט אין אַ קליינע פאַרקלענערונג אין די גאַנץ פענאָליק אינהאַלט פון עפּל זאַפט, אָבער קיין רעדוקציע אין אַנטיאַקסאַדאַנט טעטיקייט איז נישט באמערקט געוואָרן.
אין די לעצטע יאָרן, האָבן פֿאָרשער זיך קאָנצענטרירט אויף דער אַפּליקאַציע פֿון גרינער ביאָטעכנאָלאָגיע אין דער עסן־אינדוסטריע. לאַקאַסע איז איינער פֿון די נוצלעכסטע ענזימען אין דער עסן־אינדוסטריע, און געפֿינט אַפּליקאַציעס אין געביטן ווי זאַפט־פֿאַראַרבעטונג, באַקן, וויין־סטאַביליזאַציע, און פֿאַרבעסערן די אָרגאַנאָלעפּטישע קוואַליטעטן פֿון עסן־פּראָדוקטן.¹פילע העכערע פלאַנצן און מיקראָאָרגאַניזמען סעקרעטירן לאַקאַסע,²און פונגי ווי דעוטעראמיסעטעס, אַסקאָמיסעטעס, און באַסידיאָמיסעטעס קענען אויך פּראָדוצירן לאַקאַסע.³לאַקאַסע (EC 1.10.3.2) איז אַ בלויע אָקסידאַז וואָס רעדוצירט מאָלעקולאַר זויערשטאָף צו וואַסער ניצנדיק אַ סיסטעם וואָס באַשטייט פון דריי פֿאַרשידענע קופּער אַטאָמען, דערמיט אָקסידירנדיק פֿאַרשידענע פֿענאָלישע פֿאַרבינדונגען און אַראָמאַטישע אַמינען. בעת דער פּראָדוקציע פֿון פֿרוכט און גרינס זאַפטן, זענען ענזימאַטישע און נישט-ענזימאַטישע פֿאַרברוינונג קריטישע פּראָבלעמען.⁴זינט די סובסטאַנצן נעגאַטיוו אַפעקטירן די קאָליר, טעם און אַראָמאַ פון די זאַפט, מוזן זיי ווערן אַוועקגענומען.⁵
פֿון אַלע פֿרוכטן, זענען עפּל די מערסט קאָנסומירטע וועלטווײַט און אין דער אייראָפּעיִשער פֿאַרבאַנד. אין 2019, איז עפּל פּראָדוקציע געווען דריט גלאָבאַל, איבער 87 מיליאָן טאָן.⁶עפּל אַנטהאַלטן פילע פענאָלישע קאַמפּאַונדז, אַרייַנגערעכנט פלאַוואָנאָידן און פענאָלישע זויערן ווי קאַפעיק זויער און כלאָראָגעניק זויער.⁷ווייל עפּל זאַפט ווערט טיפּיש קאָנסומירט אין זיין קלאָרער פאָרעם, ווערן אַרום 50% ביז 90% פון די פענאָלישע קאָמפּאָנענטן פאַרלוירן בעת ​​דעם פֿילטראַציע פּראָצעס.⁸היינט, קאנסומערס טענדן צו קלייבן מינימאל פראצעסירטע פראדוקטן, ווי למשל טרויעריקע עפל זאפט מיט הויכן פאליפענאל אינהאלט. אבער, צוליב זיין הויכן פענאלישן אינהאלט, איז די סארט עפל זאפט באזונדערס אונטערטעניק צו פארפארבונג און פארדונקלען.⁹פארשידענע טעכנאָלאָגיעס, אַרייַנגערעכנט היץ באַהאַנדלונג מעטאָדן ווי פּאַסטעריזאַציע ביי 60-90°C, ווערן גענוצט צו רעדוצירן אָדער פאַרהיטן פארדונקלען פון עפּל זאַפט.¹⁰אָבער, לויט צו פאָרשונג דורך Sauceda-Gálvez¹¹, טערמישע פּראַסעסינג קען צעשטערן וואַלאַטאַל כעמיקאַלן און אַפעקטירן די אָרגאַנאָלעפּטישע קוואַליטעטן פון עפּל זאַפט. אַלטערנאַטיוון צו טערמישע פּראַסעסינג מעטאָדן אַרייַננעמען סופּערקריטיש טשאַד דייאַקסייד, אַלטראַווייאַליט ראַדיאַציע, אַלטראַסאַונד, הויך הידראָסטאַטיק דרוק, אָדער הויך-דרוק כאָומאַדזשעניזיישאַן.¹²די עפעקטיווקייט פון די טעכנאָלאָגיעס און די פּראָדוקציע פון ​​פּאַסיקע פרוכט זאַפטן הענגען אָפּ פון די פּאַראַמעטערס וואָס ווערן גענוצט און די פּראָדוקט קעראַקטעריסטיקס. זייער ברייטע נוצן איז באַגרענעצט דורך הויכע קאָסטן, נעגאַטיווע ווירקונגען אויף דער קוואַליטעט פון עטלעכע עסנוואַרג פּראָדוקטן, אָדער נישט גענוגיקע ענזיים ינאַקטיוואַציע.^13,14
לאַקאַסע קען געניצט ווערן צו סטאַביליזירן און קלעראַפיצירן פרוכט זאַפט.¹⁵גאָוקמען און אַנדערע.¹⁶מיר רעקאָמענדירן די נוצן פון לאַקאַסע פֿאַר קלעריפיקאַציע פון ​​פרוכט זאַפט ווייַל עס עפֿעקטיוולי אַראָפּנעמען פענאָליק קאַמפּאַונדז דורך קאָנווערטינג זיי אין פּאָלימערן אָדער אָליגאָמערן וואָס זענען לייכט אַוועקגענומען דורך קיין ולטראַפילטריישאַן מעמבראַנע, אַלאַוינג עפּל זאַפט צו האַלטן סטאַביל קאָליר און קלעריטי פֿאַר ביז זעקס וואָכן ביי 50°C. פּיוראַפייד *טריטשאָדערמאַ* לאַקאַסע איז געווען ימאָובאַלייזד אויף אַלומינאַ קרעלן און געניצט צו סעלעקטיוולי אַראָפּנעמען שלעכט-געשמאַק קאַמפּאַונדז געפֿירט דורך מיקראָביאַל קאַנטאַמאַניישאַן פון עפּל זאַפט.¹⁷
אומגעפער 80-90% פון די פליכטיגע קאמפאנענטן פון עפל זאפט זענען עסטערס און אלדעכידן, וואס געבן דעם זאפט א באזונדערן אראמא.¹⁸לאַקאַסע פֿון *טראַמעטעס ווערסיקאָלאָר* איז געוואָרן אימאָביליזירט אויף אַ ביליקן שטיצפּלאַץ געמאַכט פֿון נאַטירלעכע פֿאַזערן פֿון יונגע קאָקאָסנוס שאָלן פֿאַר קלערישונג פֿון עפּלזאַפט.¹⁹פריערדיגע שטודיעס האבן אויסגעפארשט די סטאביליזאציע פון ​​עפל זאפט (קאליר און טרויבקייט) ניצנדיק ענזיים-פרייע אדער אימאביליזאציע מעטאדן, אדער אין קאמבינאציע מיט אולטראפילטראציע.^5,19אבער, דער עפעקט פון פונגאַל לאַקאַסעס אויף די פיזיקאָכעמישע אייגנשאַפטן פון עפּל זאַפט בעת סטאָרידזש בלייבט נישט קלאָר. דעריבער, די ציל פון דעם לערנען איז געווען עקספּערימענטאַל צו אויספאָרשן די ענדערונגען אין די פיזיקאָכעמישע אייגנשאַפטן, פענאָליק קאַמפּאַונד אינהאַלט, און אַנטיאַקסאַדאַנט טעטיקייט פון עפּל זאַפט נאָך באַהאַנדלונג מיט פונגאַל לאַקאַסעס און צוויי-וואָך פרידזשידער סטאָרידזש. לאַקאַסעס האָבן די פיייקייט צו אָקסידירן פענאָליק קאַמפּאַונדז, וואָס מאכט זיי פּראַמאַסינג פֿאַר נוצן אין פאַרשידענע אינדוסטריעלע פּראָצעסן, אַרייַנגערעכנט זאַפט קלעריפיקאַטיאָן. דעם לערנען האט געפּrüפֿט לאַקאַסעס פון *Pleurotus ostreatus* NRC 620, פאָוקיסינג אויף די ידעאַל באדינגונגען פֿאַר זייער טעטיקייט און עפעקטיווקייַט אין זאַפט קלעריפיקאַטיאָן. כאָטש פאָרשונג אויף אויסטער שוואָם (P. ostreatus NRC 620) איז נאָך לימיטעד, פריערדיקע שטודיעס האָבן געפּrüפֿט ענזימען פון פאַרשידענע פונגאַל קוואלן, אַזאַ ווי Trametes versicolor און Ganoderma lucidum. דער ציל פון דעם לערנען איז געווען צו אָפּשאַצן די פּאָטענציעל אַפּלאַקיישאַן פון דעם ענזיים אין די עסנוואַרג אינדוסטריע און הויכפּונקט זייַן יינציק פּראָפּערטיעס, ספּעציעל זייַן ידעאַל pH און טעמפּעראַטור.
2,2′-אַזאָאָקסיביס(3-עטילבענזאָטהיאַזאָלין-6-סולפאָניק זויער) (ABTS) איז געקויפט געוואָרן פֿון סיגמאַ-אַלדריטש (קאַנאַדע). אַלע אַנדערע רעאַגענטן זענען געווען פֿון אַנאַליטישער גראַד.
דער נאציאנאלער פארשונג צענטער'ס מיקראביאלע קולטור זאמלונג צענטער האט באקומען דעם באקאנטן אויסטער שוואם שטאַם NRC620. נאך סובקולטור, איז דער שטאַם געהאלטן געווארן אויף קארטאפל דעקסטראז אגאר סלענטס ביי 4°C. די אינאקולום צוגרייטונג מעטאד איז געווען ווי פאלגט: 10-טאג-אלט, פולשטענדיג אנטוויקלט מייסעליום איז אינאקולירט געווארן אויף קארטאפל דעקסטראז אגאר פלאטן און אינקובירט ביי 28°C. נאך 10 טעג, זענען דריי 12-מם-דיאמעטער מייסעליום בלאקס ארויסגענומען געווארן פון די אגאר מעדיע מיט א סטערילע מעטאל לאָך און געשטעלט געווארן אין 250-מל ערלענמייער פלעשלען מיט וואטענע פּלאַגס וואס האבן אנטהאלטן 50 מל פון סטעריליזירט קולטור מעדיום (pH 5.0, ווי פריער באשריבן דורך אטמאן און אנדערע.²⁰די קולטורן זענען אינקובירט געוואָרן ביי 28°C פֿאַר 18 טעג. די קולטורן זענען דערנאָך פֿילטרירט געוואָרן דורך וואַטמאַן נומער 1 פֿילטער פּאַפּיר, און דער רעזולטאַט איז געווען אַז דער ענזיים מקור איז געווען דער מקור.
לאַקאַסע אַקטיוויטעט איז באַשטימט געוואָרן ניצנדיק ABTS ווי אַ סאַבסטראַט. די רעאַקציע געמיש (2 מל) האָט ענטהאַלטן 500 μL פון 0.3 mM ABTS (אויפגעלייזט אין 0.1 M נאַטריום ציטראַט באַפער, pH 4.5) און די נויטיקע מאָס פון ענזיים מוסטער פארדיןנט מיט דיסטילירט וואַסער.^21,22באַטראַכטנדיק אַז לאַקאַסע קען אָקסידירן ABTS ביי צימער טעמפּעראַטור (28 °C ± 2), איז ABTS אָקסידאַציע באַשטימט געוואָרן דורך מעסטן די פאַרגרעסערונג אין אַבסאָרבאַנס ביי 420 נם (ε₄₂₀= 36,000 קוביק סענטימעטער^-1 M ^-1) ניצנדיק אַן Agilent Carry-100 UV ספּעקטראָפאָטאָמעטער. איין איינהייט פון לאַקאַסע אַקטיוויטעט איז געווען נויטיק צו אָקסידירן 1 מיקראָמאָל ABTS פּער מינוט. פּראָטעין קאָנצענטראַציע איז באַשטימט געוואָרן דורך די Bradford מעטאָדע ניצנדיק רינדער סערום אַלבומין ווי אַן אינערלעכער קאָנטראָל.^23,24
נאכדעם וואס מען האט באקומען דעם ענזיים פון דעם אויסטער-שוואָם שטאַם NRC 620, איז זיין טעטיקייט געמאסטן געווארן ביי פארשידענע קולטיוואציע אינטערוואַלן פאר 25 טעג אונטער סטאַטישע באדינגונגען ביי 28 °C.
כדי צו שטודירן דעם עפעקט פון טעמפּעראַטור אויף לאַקאַסע אַקטיוויטעט, זענען עקספּערימענטן דורכגעפירט געוואָרן אין דעם טעמפּעראַטור קייט פון 20 ביז 90 °C. איידער מען האט צוגעגעבן דעם ענזיים און אָנגעהויבן די רעאַקציע, איז דער באַפער (0.1 M נאַטריום ציטראַט, pH 4.5) און סאַבסטראַט (ABTS) געמישט געוואָרן און אינקובירט פֿאַר 5 מינוט ביי פֿאַרשידענע טעמפּעראַטורן. ענזיים טערמישע סטאַביליטעט איז געשאַצט געוואָרן דורך אינקובאַציע אין 0.05 M נאַטריום פאָספֿאַט באַפער (pH 7.0) ביי 40, 50, 60, און 70 °C פֿאַר 2 שעה, בהתאמה. רעשט אַקטיוויטעט איז דערנאָך געשאַצט געוואָרן מיטן ABTS סאַבסטראַט.
דער עפעקט פון pH אויף לאַקאַסע טעטיקייט איז געוואָרן אָפּגעשאַצט מיט ABTS ווי אַ סאַבסטראַט אין 0.1 M ציטראַט-פאָספאַט באַפערס מיט אַ pH קייט פון 2.5 ביז 7.0. די ענזיים לייזונג איז געוואָרן אינקובירט ביי 40°C פֿאַר צוויי שעה אין 0.1 M ציטראַט און טריס באַפערס (pH 3, 4, 6, און 7) צו אָפּשאַצן pH סטאַביליטעט. רעזידועל טעטיקייט מיט ABTS ווי אַ סאַבסטראַט איז געוואָרן קאַלקיאַלייטיד נאָך אינקובאַציע.
די לאַקאַסע איז אינקובירט געוואָרן פֿאַר 10 מינוט אין נאַטריום פֿאָספֿאַט באַפֿער (0.05 M, pH 7.0) וואָס האָט ענטהאַלטן פֿאַרשידענע מעטאַל יאָנען (Mg2+, Cu2+, Co2+, Ca2+, Zn2+, K+, Na+, און Mn2+) ביי קאָנצענטראַציעס פֿון 2.5 mM און 10 mM, בהתאמה. דער סאַבסטראַט (ABTS) איז דערנאָך צוגעגעבן געוואָרן צו אָנהייבן די רעאַקציע, און די רעלאַטיווע אַקטיוויטעט איז אָפּגעשאַצט געוואָרן.
ABTS אקסידאציע דורך לאַקאַסע ביי פארשידענע קאָנצענטראַציעס (0.025–3 mM) איז געמאָסטן געוואָרן ביי pH 4.5 צו באַשטימען די קינעטישע פּאַראַמעטערס (Vmax און Km). די קינעטישע^{קאָנסטאַנטן}פון דער מיכאליס-מענטען גלייכונג זענען אויסגערעכנט געוואָרן מיט אַ לינעוויווער-בורק פּלאָט, וואָס צייכנט דעם קעגנגעזעצלעכן פונקט פון דער רעאַקציע ראַטע ווי אַ פֿונקציע פון ​​סאַבסטראַט קאָנצענטראַציע. די קינעטישע קאָנסטאַנטן זענען אויסגערעכנט געוואָרן פֿון דעם לינעוויווער-בורק פּלאָט מיט גראַףפּאַד פּריזמע ווערסיע 6.01 ווייכווארג.
נאכדעם וואס מען האט גוט געוואשן די עפל מיט קראן-וואסער, זענען זיי געשניטן געווארן אין האלב און אויסגעזאפט מיט א פולשטענדיג אויטאמאטישן בראון MP80 עפל-זאפטמאשין (געמאכט אין דייטשלאנד). דער זאפט איז געפילטערט געווארן דורך פיר שיכטן קעז-טוך. קיין ענזימען זענען נישט צוגעגעבן געווארן צו דער קאנטראל גרופע, בשעת 2.0% לאקאזע (די מערסט עפעקטיווע קאנצענטראציע וואס איז געטעסט געווארן) איז צוגעגעבן געווארן צו פריש צוגעגרייטן עפל-זאפט, וואס איז דערנאך געהאלטן געווארן ביי 4°C פאר צוויי וואכן.
טיטרירבארע זויערקייט (TA) און pH זענען באשטימט געווארן לויטן מעטאד פון בולטאן און זיינע חברים.^אַל.27דער pH פון יעדן מוסטער איז געמאסטן געווארן מיט א דיגיטאלן pH מעטער (JENWAY 3510 pH מעטער). טיטרירבארע זויערקייט (TA) איז אויסגערעכנט געווארן באזירט אויף מאליק זויער מיט די פאלגנדע פארמולע.
וואו V און C זענען די וואָלומען (מל) און קאָנצענטראַציע (0.1 מאָל/ל) פון דער נאַטריום הידראָקסייד לייזונג געניצט אין דער טיטראַציע, ריספּעקטיוולי. K איז דער מאַליק זויער קאָנווערסיע קאָעפיציענט, גלייך צו 0.067, און W איז די מאַסע (ג) פון עפּל זאַפט.
די גאַנצע צעלאָזלעכע סאָלידס (^{טי-די-עס}) אינהאַלט פון אַלע זאַפט מוסטערן איז באַשטימט געוואָרן מיט אַ PAL-1 קעשענע רעפראַקטאָמעטער (ATAGO, טאָקיאָ, יאַפּאַן). נאָך יעדער מעסטונג, איז די אָפּטישע לינזע געשווענקט געוואָרן מיט דעיאָניזירט וואַסער, און יעדער עפּל זאַפט מוסטער איז געטעסט געוואָרן דריי מאָל. דער ווערט פֿאַר יעדער מוסטער איז קאַלקולירט געוואָרן דורך דורכשניטלעך די דריי מעסטונגען. די דורכשניט ± סטאַנדאַרט דעוויאַציע פֿאַר יעדער עפּל זאַפט מוסטער איז אויך קאַלקולירט געוואָרן דורך דורכשניטלעך די רעזולטאַטן.
די וויסקאָעלאַסטיסיטי פון די עפּל זאַפט מוסטערן איז געווען אַססעססעד ניצן אַ ראָטאַציאָנעל וויסקאָמעטער (RV, Rheotest 2, דייטשלאַנד). די מוסטער איז געווען געשטעלט אין די "S2" צילינדער פון די וויסקאָמעטער. אויסזעענדיקע וויסקאָסיטי איז געווען רעפּרעזענטירט דורך די שיפּוע פון ​​די שער דרוק קעגן שער קורס קורווע, וואָס איז געווען קאַלקיאַלייטיד פון די שער דרוק און די קאָראַספּאַנדינג קורוועס ביי פאַרשידענע שער ראַטעס (פון 1.00 צו 437.4 s⁻¹). די פאָרמולע פֿאַר קאַלקיאַלייטינג אויסזעענדיקע וויסקאָסיטי איז ווי גייט:
וואו η איז די אויסזעהנדיקע וויסקאָסיטי (cP), τ איז די שער שפּאַנונג (dyn/cm²), γ איז די שער קורס (sec⁻¹), און (τ) ווערט קאַלקולירט ניצנדיק די טאָרק (α) און צילינדער (Z) ווערטן ניצנדיק די פאלגענדע פאָרמולע: τ = Z . α.
דער בראַונינג אינדעקס איז באַשטימט געוואָרן לויט דער מעטאָדע פֿון מײַדאַוו און אַנדערע.^אַל.29א 10-מל זאַפט מוסטער איז געווען סענטריפוגירט ביי 2750 xg פֿאַר 10 מינוט. 5 מל פון די זאַפט סופּערנאַטאַנט איז געמישט מיט 5 מל פון 95% עטאַנאָל. די אַבזאָרבאַנס פון די געמיש איז געמאסטן ביי 420 נם ניצן אַ שימאַדזו UV ספּעקטראָפאָטאָמעטער (UV-1601 PC).
גאַנץ פענאָליק אינהאַלט (TPC) איז באַשטימט קאָלאָרימעטריש ניצן די פאָלין-ציאָקאַלטעו רעאַגענט ווי באַשריבן דורך באָולטאָן עט אַל.^[27א סטאַנדאַרט קורווע פון ​​גאַליק זויער איז געווען קאַנסטרויִרט פֿאַר קאָנצענטראַציעס פון 0 ביז 500 מג/ל (^ר²= 0.997). רעזולטאַטן ווערן אויסגעדריקט ווי גאַליק זויער עקוויוואַלענטן (מג GAE/מ"ל).
לייגט צו 125 μL דיסטילירט וואַסער און 2850 μL FRAP לייזונג צו 25 μL עפּל זאַפט און לאָזט די געמיש אין דער פינצטערניש פֿאַר³⁰מינוט. דערנאך מעסט מען די אבסארבאנס ביי 593 נ"מ ניצנדיק א שימאדזו UV ספעקטראפאטאמעטער (UV-1601 PC). דער FRAP רעאגענט איז צוגעגרייט געווארן דורך מישן 300 mM אצעטאט בופער (pH 3.6), 20 mM אייזן(III) כלוריד, און 10 mM 2,4,6-טריס(2-פירידיל)טריאזין (TPTZ) (אויפגעלייזט אין 40 mM HCl) אין א פראפארציע פון ​​10:1:1. א סטאנדארט קורווע איז גענערירט געווארן ניצנדיק טראלאקס אלס דער סטאנדארט (^ר²= 0.999), און די רעזולטאַטן ווערן אויסגעדריקט ווי μM טראָלאָקס/mL.
די אַנטיאַקסאַדאַנט טעטיקייט פון די באַהאַנדלטע און נישט-באַהאַנדלטע זאַפטן איז באַשטימט געוואָרן מיט די DPPH מעטאָדע צו אָפּשאַצן זייער פיייקייט צו כאַפּן DPPH פרייע ראַדיקאַלן.³¹צען מיקראָליטער זאַפט זענען געמישט געוואָרן מיט 1 מל פון אַ DPPH לייזונג (100 μM) אין מעטאַנאָל. נאָך רעאַקציע אין דער פינצטערניש פֿאַר 30 מינוט, איז די אַבסאָרבאַנס פון דער געמיש געמאָסטן געוואָרן ביי 517 נם מיט אַ שימאַדזו UV ספּעקטראָפאָטאָמעטער (UV-1601 PC). די רעזולטאַטן זענען אויסגעדריקט געוואָרן ווי טראָלאָקס עקוויוואַלענטן (μM טראָלאָקס/מל) באַזירט אויף אַ קאַליבראַציע קורווע (_^R2= 0.990).
די באקומענע דאטן האבן געוויזן אז מאקסימום לאקאזע פראדוקציע איז באמערקט געווארן אין NRC 620 אויסטער שוואמען ביזן סוף פונעם 18טן טאג פון פערמענטאציע, דערגרייכנדיג אן אקטיוויטעט פון 1302 U/L. דאס האט געדינט אלס די באזע פארן באשטימען די אפטימאלע קולטיוואציע צייט פאר לאקאזע פראדוקציע (פיגור 1). כאטש ענזיים פראדוקציע איז געוואקסן מיט פארגרעסערטע קולטיוואציע צייט, איז די ראטע פון ​​פארגרעסערונג נישט געווען גלייך פראפארציאנעל צו קולטיוואציע צייט; נאך 21 טעג, איז די ענזיים אקטיוויטעט געוואקסן מיט בלויז 90 U/L (צו 1390 U/L). דעריבער, 18 טעג איז לעצטנס אויסגעקליבן געווארן אלס די אפטימאלע קולטיוואציע צייט צו באלאנסירן פראדוקט אויסגעבן מיט די עקאנאמישע בענעפיטן פון פארגרעסערטע קולטיוואציע צייט.
ווירקונג פון קולטיוואציע צייט אויף לאַקאַסע ייעלד אין Pleurotus ostreatus NRC 620. דריי (12 מ״מ) פונגאַל מיסעליאַל בלאַקס זענען ינאָקולירט געוואָרן אין 50 מל פון סטערילע מעדיום און דערנאָך קאָלטיווירט ביי 28 °C פֿאַר פֿאַרשידענע צייטן.
אין איינקלאַנג מיט אַנדערע שטודיעס, ווײַזן אונדזערע רעזולטאַטן אַז די אידעאַלע קולטור-פּעריאָד צו דערגרייכן די שפּיץ לאַקאַסע סעקרעציע דורך פונגי איז מסתּמא צווישן 7 און 36 טעג.³²לויט אזיקע און אנדערע.³³, *Trametes polyzona* WRF03 האט פראדוצירט די העכסטע מאס פון לאַקאַסע ביזן סוף פונעם ניינטער טאָג פון פערמענטאַציע, מיט אַ ספּעציפֿישער אַקטיוויטעט פון 1637 U/mg פּראָטעין. ווייטער, אָטמאַן און אַנדערע.³⁴געפונען אז *Trichoderma harzianum* S7113 האט אויסגעשיידט א גרויסע מאס לאַקאַסע אויפן פינפטן טאָג פון קולטור. די לאַקאַסע פּראָדוקציע ראטע האט דערגרייכט א שפּיץ אַקטיוויטעט אויפן פערצנטן טאָג און דערנאָך ביסלעכווייַז געפאלן.³⁴כאָטש ענזיים סעקרעציע קען אויך פּאַסירן בעת ​​דער הויפּט וואוקס פאַזע, עס וואַקסט געוויינטלעך בעת דער צווישן פאַזע און ווערט אויסגערופן דורך דעם קאַנסאַמשאַן פון אַ קוילן אָדער שטיקשטאָף מקור.^34,35
כאָטש לאַקאַסע פֿון Pleurotus ostreatus NRC 620 האָט אויסגעוויזן הויכע אַקטיוויטעט איבער אַ ברייטן טעמפּעראַטור קייט פֿון 50°C ביז 80°C, נאָענט צו שפּיץ אַקטיוויטעט (69–98%), איז איר מאַקסימום אַקטיוויטעט באמערקט געוואָרן ביי 70°C (פֿיג. 2a). אַרויס פֿון דעם טעמפּעראַטור קייט, איז די ענזיים אַקטיוויטעט פֿאַרמינערט געוואָרן ביי אַרום 70°C. די רעזולטאַטן פֿאָרשלאָגן אַז דער ענזיים איז אַקטיוו ביי הויכע טעמפּעראַטורן, מסתּמא ווייל הויכע טעמפּעראַטור פֿאַרגרעסערט די קינעטישע ענערגיע פֿון דער רעאַקציע.
ווירקונג פון רעאַקציע טעמפּעראַטור (א) און pH (ב) אויף לאַקאַסע טעטיקייט אין *Pleurotus ostreatus* NRC 620. טעמפּעראַטורן פון 20 ביז 90 °C זענען דערגרייכט געוואָרן דורך פאַר-אינקובירן די געמיש ביי פאַרשידענע טעמפּעראַטורן פֿאַר 5 מינוט איידער צוגעבן דעם ענזיים און אָנהייבן די רעאַקציע. דער ווירקונג פון pH אויף לאַקאַסע טעטיקייט איז געווען אַססעססעד ניצן ABTS ווי אַ סאַבסטראַט אין סאַלושאַנז מיט 0.1 M ציטראַט-פאָספאַט באַפער איבער אַ pH קייט פון 2.5 ביז 7.0.
לויט עזיק און^אַל.33, די אָפּטימאַלע טעמפּעראַטור פֿאַר *Trametes polyzona* WRF03 לאַקאַסע איז 55 °C, וואָס איז די זעלבע ווי פֿאַר *Ganoderma lucidum*^{לאַקאַסע36}און ענלעך צו דער אָפּטימאַלער טעמפּעראַטור (50 °C) פֿאַר *Trametes polyzona* KU-RNW02737^{לאַקאַסע} . ^{באַלדריאַן38}באַמערקט אַז, ווי פֿאַר אַנדערע ליגנין-דעגראַדירנדיקע ענזיים סיסטעמען, איז די אידעאַלע טעמפּעראַטור קייט פֿאַר לאַקאַסע צווישן 50 און 70 °C.
די רעזולטאַטן האָבן געוויזן אַז דער ענזיים האָט אויסגעשטעלט די העכסטע אַקטיוויטעט ביי pH 3.0, דערגרייכנדיק 94% אַקטיוויטעט ביי pH 3.5. אָבער, עס איז געבליבן אַקטיוו איבער אַ ברייט pH קייט פון 2.5 ביז 7.0 (פיגור 2ב). ווייטער, עס האָט אויסגעשטעלט העכערע אַקטיוויטעט אין זויערע באדינגונגען קאַמפּערד צו נייטראַלע אָדער אַלקאַלישע באדינגונגען. זיין אַקטיוויטעט איז געבליבן לפּחות 77% איבער די pH קייט פון 2.5 ביז 4.5, אָבער בלויז דערגרייכט בעערעך 38% ביי pH 7.0. דער אָפּטימאַלער pH פֿאַר לאַקאַסע פון ​​*Trametes polyzona* WRF03 איז געווען 4.533, וואָס איז די זעלבע ווי דער pH פֿאַר לאַקאַסעס פון *Trametes polyzona* KU-RNW02737, *Trichoderma harzanium* 39, *Pleurotus* sp. 40, און *Trametes hirsuta* 41. אָבער, לויט דער שטודיע דורך טשערין עט אַל.⁴², דער אָפּטימאַלער pH פֿאַר לאַקאַסע פֿון *Polymorpha f. sp.* WR710-1 איז 2.2, בשעת דער אָפּטימאַלער pH פֿאַר לאַקאַסע פֿון *Polymorpha f. sp.* IBL-04 איז 5.043. די בינדונג פֿון הידראָקסייד אַניאָנס (לאַקאַסע אינהיביטאָר) צו די קופּער אַטאָמען פֿון T2/T3 לאַקאַסע קען זיין די סיבה פֿאַר דער פֿאַרמינדערטער לאַקאַסע אַקטיוויטעט אונטער נייטראַלע אָדער אַלקאַלישע pH באַדינגונגען. דאָס קען שטערן דעם אינערלעכן עלעקטראָן איבערפֿירונג פֿון דעם T1 צענטער צום T2/T3 צענטער, דערמיט^{לימיטירנדיק}די ענזיים טעטיקייט23,44
דורך אינקובירן דעם ענזיים ביי פארשידענע טעמפעראטורן, האט מען געפונען אז סיי אינקובאציע צייט און סיי טעמפעראטור האבן באאיינפלוסט די ענזיים סטאביליטעט. באמערקענסווערט, לאקאזע פון ​​*Trametes polyzona* NRC 620 האט אויסגעוויזן העכערע סטאביליטעט ביי 40℃ און 50℃, און האט איבערגעהאלטן 68.33% און 59.61% פון איר אנפאנגס טעטיקייט, בהתאמה, נאך 120 מינוט (פיגור 3a). אין קאנטראסט, אונטער די זעלבע באדינגונגען (40℃ און 50℃, 120 מינוט), האט לאקאזע פון ​​*Trametes polyzona* WRF03 איבערגעהאלטן 64.38% און 42.92% פון איר טעטיקייט, בהתאמה.³³פארקערט, פארגרעסערונג פון אינקובאציע צייט און טעמפעראטור האט פארקלענערט די סטאביליטעט פון *Trametes polyzona* NRC 620 לאקאזע; נאך אינקובאציע ביי 60℃ און 70℃ פאר 60 מינוט, איז איר אקטיוויטעט געפאלן צו 39.24% און 1.72%, בהתאמה (פיגור 3a). אין איינקלאנג מיט די עקספערימענטאלע רעזולטאטן, האט לאקאזע פון ​​*Trametes polyzona* WRF03 געוויזן העכערע סטאביליטעט ביי 40 און 50℃ איבערן גאנצן טערמישן באהאנדלונג פראצעס.³³ענלעך, לוענגדזשאַראָענקיט עט.^אַל.37און טשערין עט.^אַל.42האט געמאלדן די פעסטקייט פון לאַקאַזעס פון Trametes polyzona KURNW027 און Trametes polyzona WR710-1 ביי 50 °C פאר 1 שעה, בהתאמה. אלס א נוצלעכער ביאָקאַטאַליסט וואס קען ווערן גענוצט אין פארשידענע ביאטעכנאָלאָגישע פעלדער, זאָל לאַקאַזע האבן גוטע פעסטקייט און פאָרשטעלונג איבער א ברייטן טעמפּעראַטור קייט.
טערמאסטאטישע פעסטקייט (א) און pH פעסטקייט (ב) פון לאַקאַסע פון ​​*Pleurotus ostreatus* NRC 620. טערמאסטאטישע פעסטקייט איז געווארן אפגעשאצט דורך אינקובירן די ענזיים לייזונג אין 0.05 M סאָדיום פאָספֿאַט באַפֿער (pH 7.0) ביי 40, 50, 60, און 70 °C פאר 2 שעה, בהתאמה. pH פעסטקייט איז געווארן אפגעשאצט דורך אינקובירן די ענזיים לייזונג אין 0.1 M ציטראַט באַפֿער און טריס באַפֿער (pH 3, 4, 6, און 7) ביי 40 °C פאר 2 שעה. רעזידועל טעטיקייט איז געווארן אויסגערעכנט ניצנדיק ABTS אלס א סאַבסטראַט נאך אינקובאציע.
כדי צו באַשטימען די אָפּטימאַלע באַדינגונגען פֿאַר ענזיים נוצן און סטאָרידזש, האָבן מיר אויסגעפאָרשט דעם ווירקונג פון pH אויף לאַקאַסע סטאַביליטעט. ויסשטעלן צו פאַרשידענע pH ווערטן האָט באַדייטנד אַפעקטירט די סטאַביליטעט פון דער פּראָטעין סטרוקטור, דערמיט השפּעהדיק אויף די סטאַביליטעט און טעטיקייט פון דער ענזיים מאָלעקול. די רעזולטאַטן האָבן געוויזן אַז דער ענזיים איז געווען ווייניקער סטאַביל אונטער זויערע באַדינגונגען, בשעת עס האָט דעמאָנסטרירט בעסערע סטאַביליטעט ביי העכערע pH ווערטן (נייטראַלע און אַלקאַלישע געגנטן). ביי pH ווערטן פון 7.0, 6.0, 4.0 און 3.0, זענען די ענזיים ריטענשאַן ראַטעס נאָך 120 מינוט געווען בעערעך 100%, 62.54%, 52.39% און 11.14%, ריספּעקטיוולי (פיגור 3ב). *Strombus multisus* WRF03 לאַקאַסע האָט געוויזן העכערע סטאַביליטעט ביי נייטראַלע pH ווערטן (5.5–6.5) און נידעריקערע סטאַביליטעט ביי זויערע pH ווערטן (אונטער 4.0). נאך 120 מינוט ביי pH ווערטן פון 5.5, 6.0, און 6.5, זענען די ענזיים ריטענשאַן ראַטעס געווען בערך 82%, 100%, און 93%, בהתאמה.³³כאַירין און אַנדערע.⁴²באמערקט אז לאַקאַסע פון ​​Trametes polyzona WR710-1 איז געווען סטאַביל אין די pH קייט פון 6.0 צו 7.0, בשעת Sayed et al.⁴⁵האט געוויזן אז לאַקאַסע איז מער סטאַביל אונטער נייטראַלע pH באדינגונגען. אָבער, לאַקאַסע פון ​​סערענאַ יוניקאָלאָר האט אויך אויסגעוויזן סטאַביליטעט אונטער אַלקאַלישע באדינגונגען (pH 9.0)⁴⁶די לאַקאַזעס וואָס זענען שטודירט געוואָרן האָבן געוויזן הויכע סטאַביליטעט איבער אַ ברייטן pH קייט. דאָס קען זיין אַ וויכטיקע כאַראַקטעריסטיק פֿאַר אינדוסטריעלע אַפּליקאַציעס.
זינט עטלעכע מעטאַל יאָנען האָבן ביידע סטימולאַטאָרישע און ינכיבאַטאָרישע ווירקונגען אויף ענזיים טעטיקייט, מוז זייערע ווירקונגען אויף ענזיים טעטיקייט באַטראַכט ווערן אין אינדוסטריעלע אַפּליקאַציעס. דאָס איז קריטיש ווייל מעטאַל יאָנען זענען געוויינטלעכע סביבה קאַנטאַמאַנאַנץ וואָס קענען ווירקן די פעסטקייט און סינטעז פון עקסטראַסעלולאַר ענזימען.⁴⁷כדי צו אויספארשן די ווירקונגען פון פארשידענע מעטאל יאנען אויף לאקאזע פון ​​*Pleurotus ostreatus* NRC 620, האבן מיר דורכגעפירט קארעספאנדירנדע עקספערימענטן. ווי געוויזן אין פיגור 4, דעפענדינג אויף דעם טיפ מעטאל גענוצט, האט פארגרעסערן די מעטאל יאן קאנצענטראציע פון ​​2.5 mM צו 10 mM נעגאטיוו באאיינפלוסט די ענזיים פונקציע. למשל,^מג²⁺ , ^קאָ²⁺ , ^Zn²⁺, און^קו²⁺קען סטימולירן און אַקטיווירן די ענזיים טעטיקייט, בשעת^נאַ⁺ , ^מ²⁺ , ^קאַ²⁺, און^ק⁺קען שטערן די ענזיים טעטיקייט. ביי א קאנצענטראציע פון ​​10 mM, זענען Cu²⁺ און Mg²⁺ יאנען געווען די מערסט שטארקע אקטיוואטארן פון לאקאזע טעטיקייט פון *Pleurotus ostreatus* NRC 620, צושטעלנדיג אן אקטיוואציע גראד פון בערך 34% און 20%, בהתאמה. אבער, ביי א קאנצענטראציע פון ​​10 mM, זענען Ca²⁺ יאנען געווען די מערסט שטארקע אינהיביטאר פון לאקאזע, רעדוצירנדיג ענזיים טעטיקייט מיט בערך 60%.
דער עפעקט פון מעטאַל יאָנען אויף דער טעטיקייט פון Pleurotus ostreatus NRC 620 לאַקאַסע. די לאַקאַסע איז אינקובירט געוואָרן פֿאַר 10 מינוט אין נאַטריום פאָספאַט באַפער (0.05 M, pH 7.0) וואָס האָט ענטהאַלטן פֿאַרשידענע מעטאַל יאָנען אין קאָנצענטראַציעס פון 2.5 mM און 10 mM. די רעאַקציע איז דערנאָך אָנגעהויבן געוואָרן דורך צולייגן דעם סאַבסטראַט (ABTS), נאָכדעם איז די רעלאַטיווע טעטיקייט געמאָסטן געוואָרן.
אונדזערע רעזולטאַטן זענען אין איינקלאַנג מיט די פון אַנדערע מחברים וואָס האָבן געפֿונען אַז Mg²⁺ און Cu²⁺ פֿאַרשטאַרקן די אַקטיוויטעט פֿון *Trametes polyzona* WRF03³. קאַסטאַנאָ און אַנדערע האָבן געפֿונען אַז לאַקאַסע פֿון *Xylaria* sp. ווערט אין אַ געוויסן גראַד סטימולירט דורך קופּער יאָנען (Cu²⁺). דערצו, פֿאָראָוטאַנפֿאַר און אַנדערע האָבן דורכגעפֿירט ענלעכע שטודיעס אויף לאַקאַזעס פֿון *Paraconiothyrium variabile* און *Trametes pubescens*, בהתאמה. דער טיפּ II קופּער-בינדונגס אָרט (T2) פֿון דעם ענזיים קען זיין געזעטיקט מיט Cu²⁺ ביי אַ געגעבענער קאָנצענטראַציע, וואָס קען דערקלערן די סטימולאַציע פֿון לאַקאַסע אַקטיוויטעט ביי העכערע Cu²⁺³⁹ קאָנצענטראַציעס. זינט ווייסע פויל פונגי לאַקאַסעס זענען אָקסידאַזעס וואָס אַנטהאַלטן קייפל קופּער אַטאָמען, די ווירקונגען פון קופּער יאָנען אויף לאַקאַס טעטיקייט זענען דייווערס און קייט פון סטימולאַטאָרי און ינכיבאַטאָרי צו נייטראַל.⁵¹ אין קאַנטראַסט, זשו עט אַל.^[52]געמאלדן אז^קו²⁺האט געשטערט די לאַקאַסע טעטיקייט פון טייוואַן אונטערערדישע טערמיט (Odontotermes formosanus). אָבער, לאַקאַסע פון ​​Cerena sp. HYB07^[53]און קליטאָסיבע מאַקסימאַ^[54]זענען נישט געווען אַפעקטירט דורך קופּער יאָנען.
די סאַבסטראַט ספּעציפֿישקייט איז געווען רעפּרעזענטירט דורך אירע קינעטישע פּאַראַמעטערס (Km און Vmax); וואָס שטאַרקער די בינדונג אַפיניטי פון דעם סאַבסטראַט צום ענזיים, אַלץ נידעריקער דער Km ווערט און אַלץ העכער די סאַבסטראַט ספּעציפֿישקייט.^3,21,55די קינעטישע פאראמעטערס (Km און Vmax) פון לאַקאַסע פון ​​*Pleurotus ostreatus* NRC 620 זענען באַשטימט געוואָרן מיט GraphPad Prism 6.0 ווייכווארג דורך צייכענען דעם Lineweaver-Burk פּלאָט (פיגור 5). ווען מען ניצט ABTS ווי אַ סאַבסטראַט, זענען די רעזולטאַטן געווען 1.99 mM און 16217 μmol.^{מין⁻¹ ל⁻¹,}ריספּעקטיוולי. עלסאַיעד און אַנדערע.²¹געמאלדן אז די Km ווערטן פאר ABTS אקסידאציע זענען געווען 0.1 mM און 0.064 mM, בהתאמה, וואס ווייזט אויף א הויכע אפיניטי פון Lac A און Lac B איזאענזימען פאר ABTS. ווייטער, די Vmax ווערטן זענען געווען 0.182 μmol.^מין⁻¹און 0.603 מיקראָמאָל^מין⁻¹, בהתאמה. דער באקומענער Km ווערט איז געווען נידעריגער ווי יענער פון Trametes polyzona WRF03 (8.66 mM); דערצו, זייער Vmax ווערט (1429 mmol min⁻¹) איז אויך געווען^{נידעריקער}ווען מען ניצט ABTS אלס א סאַבסטראַט.33 ענלעך, די Km ווערטן פון Lentinus squarrosulus MR13 און Trametes sp. AH28-2 לאַקאַסע קאָנצענטראַציעס זענען געווען 0.0714 mM און 0.025 mM, ריספּעקטיוולי, און די Vmax ווערטן זענען געווען 0.0091 mM מין−1 און 0.67 mM מין−1 מג−1 (רעלאַטיוו צו ABTS)^{, ריספּעקטיוולי.56,57}
דער עפעקט פון ABTS קאנצענטראציע אויף דער טעטיקייט פון לאקאזע פון ​​*Pleurotus ostreatus* NRC 620 איז געווארן אויסגעפארשט, און א לייןוויווער-בורק פלאט פון דעם קעגנגעזעצלעכן פון דער אנפאנגס-רעאקציע גיכקייט קעגן ABTS קאנצענטראציע איז געווארן געצייכנט. די אקסידאציע רעאקציע פון ​​ABTS מיט פארשידענע קאנצענטראציעס (0.025–3.0 mM) פון לאקאזע איז געמאסטן געווארן ביי pH 4.5 צו באשטימען די קינעטישע פאראמעטערס (Vmax און Km). די מיכאליס-מענטען קינעטישע קאנסטאנטן זענען אויסגערעכנט געווארן ניצנדיג דעם לייןוויווער-בורק פלאט פון דעם קעגנגעזעצלעכן פון דער רעאקציע גיכקייט קעגן דער סובסטראט קאנצענטראציע. די קינעטישע קאנסטאנטן זענען אויסגערעכנט געווארן פון דעם לייןוויווער-בורק פלאט ניצנדיג GraphPad Prism 6.01 ווייכווארג.
טראדיציאנעלע קלעריפיצירנדיקע ענזימען, ווי למשל פּעקטינאַזעס, הידראָליזירן פּעקטישע סובסטאַנצן, רעדוצירן וויסקאָסיטי און טרויבקייט. זיי ברעכן עפעקטיוו אַראָפּ סטרוקטורעלע פּאָליסאַכאַרידן און ווערן אָפט געניצט אין קאָמבינאַציע מיט אַנדערע ענזימען, ווי למשל צעלולאַזעס און העמיסעללולאַזעס, צו פֿאַרבעסערן די פּראָדוקציע און קלאַרקייט. אָבער, פּעקטינאַזעס צילן נישט ספּעציפֿיש אויף פענאָלישע קאַמפּאַונדז, וואָס זענען די הויפּט ביישטייערער צו טרויבקייט און אָקסידאַטיווער ברוינונג, ספּעציעל אין זאַפטן ווי עפּל און וויינטרויבן זאַפט.⁵⁸אין קאנטראסט, לאַקאַזעס קאַטאַליזירן די אַקסאַדיישאַן פון פענאָליק קאַמפּאַונדז, פּאָלימערייזינג זיי אין גרעסערע, נישט-לעזלעך מאַלעקולז וואָס קענען זיין אַוועקגענומען דורך סעדימענטאַטיאָן אָדער פילטריישאַן. דעם מעקאַניזאַם ניט בלויז ימפּרוווז קלאַרקייַט אָבער אויך פאַרלענגערט די האַלטבאַרקייט פון זאַפט דורך רידוסינג די ליקעליהאָאָד פון אַקסאַדאַטיוו ברויןינג געפֿירט דורך פענאָליק קאַמפּאַונדז. דערצו, לאַקאַזע-באזירט קלעראַפאַקיישאַן פּראַסעסאַז קענען זיין דורכגעפירט אונטער מילדע פּראַסעסינג באדינגונגען (pH 3.5-5.5, טעמפּעראַטור 25-40 °C), מאכן זיי פּאַסיק פֿאַר דעליקאַטע זאַפטן אָן קאַמפּראַמייזינג זייער נוטרישאַנאַל אָדער אָרגאַנאָלעפּטיק פּראָפּערטיעס.⁵⁹שטודיעס האבן געוויזן אז פּעקטינאַזע באַהאַנדלונג קען קלעָר מאַכן זאַפט אין 1-2 שעה, בשעת לאַקאַסע באַהאַנדלונג טיפּיש דאַרף אַ לענגערע רעאַקציע צייט (3-6 שעה) צו גאָר רעדוצירן פענאָלישע קאַמפּאַונדז. אָבער, דעם פּראָצעס קען מען אָפּטימיזירן דורך ימאָובאַליזירן דעם ענזיים אָדער דורך קאָמבינירן לאַקאַסע מיט מעכאַנישע קלעָרירונג מעטאָדן.⁶⁰אין דעם שטודיע, האט ענזיים פּראָפיל פון די רויע עקסטראַקט געוויזן באַדייטנדיקע לאַקאַסע און α-אַמילאַזע אַקטיוויטעטן, בשעת פּעקטינאַזע און קסילאַנאַזע אַקטיוויטעטן זענען געווען גאָר נידעריק, און צעלולאַזע טעטיקייט איז נישט דעטעקטירט געוואָרן. דעריבער, די רעדוקציע אין טרויבקייט און פענאָליק אינהאַלט איז געווען דער הויפּט רעכט צו דער אַקציע פון ​​לאַקאַסע, בשעת די ענדערונג אין וויסקאָסיטי קען טיילווייז זיין רעכט צו דער אַקציע פון ​​אַמילאַזע.
טאַבעלע 1 ווײַזט די פיזיקאָכעמישע פּאַראַמעטערס פון פריש געפּרעסטע עפּל זאַפט און לאַקאַסע-באַהאַנדלטע מוסטערן. די רעזולטאַטן האָבן געוויזן אַז די פּראָדוקציע פון ​​פריש געפּרעסטע עפּל זאַפט (71.59%) איז געווען נידעריקער ווי די פון לאַקאַסע-באַהאַנדלטע מוסטערן (87.34%). די רעזולטאַטן זענען קאָנסיסטענט מיט די רעזולטאַטן פון פּילניק און אָראַנדזש.⁶¹, וועלכע האבן אנגעוויזן אז די נוצן פון ענזימען אין פרוכט פראצעסירונג קען פארגרעסערן זאפט אויסברויך, פארבעסערן פילטראציע, און באקומען הויך-קוואליטעט, קלארן זאפט פאר קאנצענטראציע. די פארגרעסערונג אין זאפט אויסברויך איז הויפטזעכליך צוליב דער פארגרעסערונג אין אינהאלט פון צעלייזבארע צוקערס אין דעם זאפט. בעת ענזימאטישער הידראליז פון פרוכטן, ווערן מעזאגלעא און פּעקטין אין די צעל ווענט פון דעם פראדוקט פארניכטעט און פארוואנדלט אין צעלייזבארע סובסטאנצן ווי נייטראלע צוקערס און זויערן.^62.דער pH ווערט פון דעם ענזיים-באהאנדלטן עפּל זאַפט איז געווען באַדייטנד נידעריגער ווי דער פון דער קאָנטראָל גרופּע (P < 0.05), און דער pH ווערט פון ביידע גרופּעס איז באַדייטנד געשטיגן בעת ​​סטאָרידזש (טאַבעלע 1). די רעזולטאַטן זענען קאָנסיסטענט מיט די פון מאַרק און אַנדערע.⁶³, וועלכע האבן באמערקט אז דער pH פון קאשו פרוכט זאפט האט זיך געפאלן נאך סטאָרידזש נאך היץ באהאנדלונג. פּעקטין דעגראַדאַציע און גאַלאַקטוראָניק זויער פאָרמאַציע נאך ענזיים באַהאַנדלונג קען זיין פאַראַנטוואָרטלעך פֿאַר דער פאַרגרעסערונג אין pH בעשאַס סטאָרידזש. דער pH פון ענזיים-באַהאַנדלטע מוסטערן איז געבליבן צווישן 4.05 און 4.31 איבער סטאָרידזש, בשעת דער pH פון נישט-באַהאַנדלטן עפּל זאפט איז געווען צווישן 4.12 און 4.33.
די גאַנצע זויערקייט (TA) פון ביידע נישט-באַהאַנדלטע און לאַקאַסע-באַהאַנדלטע מוסטערן האָט געוויזן אַ פאַרקלענערונג אין דער טענדענץ מיטן פאַרגרעסערן די סטאָרידזש צייט (טאַבעלע 1). די פאַרקלענערונג אין זויערקייט איז געווען צוגעשריבן צו דער קאָנווערסיע פון ​​אָרגאַנישע זויערן צו קאַרבאָוכיידרייטן אָדער ענזימאַטישע רעאַקציעס, ווי אויך אַקסאַדיישאַן בעת ​​זאַפט סטאָרידזש.⁶⁴די גאַנצע אַסידאַטי פון די קאָנטראָל עפּל זאַפט און ענזיים-באַהאַנדלטע מוסטערן איז געווען נידעריקער ווי די פון אַנדערע זאַפטן (ערדבערי זאַפט 0.9%, פלוים זאַפט 2.2%, קומקוואַט זאַפט 1.0%, אַפּריקאָס זאַפט 2.4%, מאַראַנץ זאַפט 0.8%), אָבער ענלעך צו די פון אַנדערע זאַפטן (למשל, באַרנע זאַפט 0.3%).⁶²די אונטערשיידן אין נישט-באהאנדלטן פריש-געקוועטשטן עפל-זאפט קענען זיין צוליב פארשידענע פאקטארן ווי וואקסנדיקע באדינגונגען, גענעטישע פאקטארן, צייטיגקייט שטאפל, און פראצעסירונג מעטאדן.⁶⁵די פארקלענערונג אין גאַנצער אַסידאַטי פון קאָנטראָל און לאַקאַסע-באַהאַנדלטן עפּל זאַפט איז קאָנסיסטענט מיט די רעזולטאַטן פּרעזענטירט דורך סינגה et al.⁶⁶וועגן דעם פארקלענערונג אין גאַנץ זויערקייט פון דזשין נואָ עפּל זאַפט נאָך 74 טעג פון סטאָרידזש. אויף די אנדערע האַנט, אָשמיאַנסקי און וואָדזשילאָ⁶⁷האט נישט געפונען קיין באדייטנדע ענדערונגען אין דער זויערקייט פון עפּל זאַפט ווען מען האט שטודירט דעם ווירקונג פון טראדיציאנעלע קלעריפיקאציע מעטאָדן.
די רעזולטאַטן וואָס ווערן פּרעזענטירט אין טאַבעלע 1 ווײַזן אָן אַז דער ווערט פֿון גאַנץ סאַליאַבאַל סאָלידס (TSS) פֿון דעם לאַקאַסע-באַהאַנדלטן עפּל זאַפט איז געווען העכער ווי דער פֿון דעם נישט-באַהאַנדלטן מוסטער. די רעזולטאַטן זענען אין איינקלאַנג מיט די פֿאַרעפֿנטלעכטע שטודיעס.^{. 68}ווייטער, ווייַזט טאַבעלע 1 אַז דער TSS ווערט פון דער קאָנטראָל עפּל זאַפט גרופּע איז געווען 9.58 ביים אָנהייב צייט פונקט און האָט דערגרייכט 11.05 ביים סוף פון דער סטאָרידזש פּעריאָדע. די ווערטן זענען נידעריקער ווי די TSS ווערטן פון פרישן עפּל זאַפט באַריכטעט דורך כאַמיד און אַנדערע.^{. 69}(11.2 און 11.80, בהתאמה). דער TSS ווערט פון די לאַקאַסע-באַהאַנדלטע עפּל זאַפט מוסטערן איז באַדייטנד געשטיגן, אָנהייבנדיק פון 11.23 און דערגרייכנדיק 12.93 נאָך צוויי וואָכן פון סטאָרידזש ביי 4°C (טאַבעלע 1). א ענלעכע פאַרגרעסערונג אין TSS בעת סטאָרידזש איז אויך באמערקט געוואָרן אין ציטרוס פירות, לימענעס און זיסע מאַראַנצן. די פאַרגרעסערונג אין גאַנץ סאַליאַבאַל סאָלידס (TSS) בעת סטאָרידזש קען זיין רעכט צו דער הידראָליז פון פּאָליסאַקאַרידעס (שטאַרקע) צו מאָנאָסאַקאַרידעס (צוקער), די פאַרגרעסערונג אין קאָנצענטראַציע רעכט צו זאַפט דעכידראַטיישאַן, און די דעגראַדאַציע פון ​​פּעקטין אין דעם זאַפט צו סאַליאַבאַל סאָלידס. די פאַרגרעסערונג אין גאַנץ סאַליאַבאַל סאָלידס (TSS) איז מסתּמא רעכט צו דער פאַרגרעסערונג אין סאַליאַבאַל צוקערס, וואָס קען זיין געשאפן דורך די קאַנווערזשאַן פון פּעקטין אָדער צעלולאָזע צו סאַליאַבאַל צוקערס דורך פּעקטין אָדער צעלולאָזע, בהתאמה, אָדער דורך די הידראָליז פון שטאַרקע צו צוקערס, ווי געמאלדן דורך האַמעד עט על.^69.דער עפעקט פון לאַקאַסע אויף די אייגנשאַפטן פון עפּל זאַפט קען מען וויזועל באַטראַכטן, ווייל לאַקאַסע-באַהאַנדלטער עפּל זאַפט ווייזט בעסערע פליסאַביליטי און נידעריקערע וויסקאָסיטי ווי נישט-באַהאַנדלטער זאַפט. די אָבסערוואַציע איז רעקאָרדירט ​​אין טאַבעלע 1; די וויסקאָסיטי פון דעם ענזיים-באַהאַנדלטן מוסטער איז געווען 1.87 cP, בשעת די וויסקאָסיטי פון דעם קאָנטראָל מוסטער איז געווען 2.95 cP. די באַדייטנדיקע פאַרקלענערונג אין וויסקאָסיטי איז מסתּמא רעכט צו דער העכערער וואַסער-האַלטן קאַפּאַציטעט פון פּעקטין-ווי סאַבסטאַנסעס און די פאָרמירונג פון אַ קאָוכיסיוו נעץ סטרוקטור.
אין דעם שטודיע, איז דער עפעקט פון לאַקאַסע אויף דעם ברוינונג אינדעקס (BI) פון עפּל זאַפט אויסגעפאָרשט געוואָרן דורך מעסטן די אַבסאָרבאַנס ביי 420 נם מיט אַ ספּעקטראָפאָטאָמעטער. די רעזולטאַטן ווערן געוויזן אין טאַבעלע 1. בעת סטאָרידזש, האט דער BI פון עפּל זאַפט מוסטערן אין ביידע די באַהאַנדלטע און נישט באַהאַנדלטע גרופּעס געוויזן אַ ביסלעכווייַז וואַקסנדיקע טענדענץ. BI שפּיגלט אָפּ דעם גראַד פון ברוינונג און קען דינען ווי^{אַ וויכטיקע}אינדיקאַטאָר פון ענזימאַטישע און נישט-ענזימאַטישע ברוינונג רעאַקציעס. די אַבסאָרבאַנס איז באַדייטנד געוואַקסן בעת ​​סטאָרידזש (P < 0.05). ביים סוף פון סטאָרידזש, די_A420ווערט פון עפּל זאַפט מוסטערן אין די קאָנטראָל און ענזיים-באַהאַנדלטע גרופּעס איז געשטיגן מיט בערך 217% און 121%, ריספּעקטיוולי (טאַבעלע 1). די רעזולטאַטן ווייַזן אַז ענזיים באַהאַנדלונג קען עפעקטיוו רעדוצירן די ברוינונג גראַד מיט בערך 56%. די רעזולטאַטן פון Bezerra et al.^[19] זענען אין איינקלאַנג מיט אונדזערע רעזולטאַטן; זיי האָבן גענוצט לאַקאַסע-גלוטאַראַלדעהייד-קאָקאָסנוס פיברע צו קלעָרן עפּל זאַפט, און דאָס האָט רעדוצירט זיין אָריגינעלן קאָליר מיט 61%.
כאָטש פּאָליפענאָלס אין פרוכט זאַפטן האָבן positive דערנערונגס- און טעראַפּעווטישע ווירקונגען אויף דעם מענטשלעכן קערפּער, קענען זיי אויך רעאַגירן מיט פּראָטעאינען, פאַראורזאַכן זאַפט טרובעקייט, סעדימענטאַציע אָדער טרובעקייט, דערמיט ענדערן דעם טעם און אַראָמאַ פון דעם פּראָדוקט און רעדוצירן זיין האַלטבּאַרקייט.⁷¹די ציל פון דעם שטודיע איז געווען צו זיכער רעדוצירן דעם פענאָליק קאַמפּאַונד אינהאַלט פון עפּל זאַפט ניצן לאַקאַסע פון ​​Pleurotus ostreatus NRC 620. די רעזולטאַטן פּרעזענטירט אין טיש 1 ווייַזן אַז דער גאַנץ פענאָליק קאַמפּאַונד אינהאַלט פון לאַקאַסע-באַהאַנדלטן עפּל זאַפט איז געווען באַדייטנד רידוסט איידער סטאָרידזש ביי 4 °C. דערצו, דער גאַנץ פענאָליק קאַמפּאַונד אינהאַלט איז אויך דיקריסט בעשאַס סטאָרידזש אין ביידע סאַמפּאַלז שטודירט (טיש 1). פאָרשונג דורך סאַנדרי עט אַל.⁷²האט געוויזן אז ענזיים-באהאנדלטער עפל זאפט קען אויפהאלטן זיין אנטיאקסידאנט טעטיקייט און פענאליק קאמפאונד אינהאלט. אבער, די רעזולטאטן פון א שטודיע דורך לעטערא און אנדערע.⁷³ווײַזן אַז באַהאַנדלונג פון מאַראַנץ זאַפט מיט פונגאַל לאַקאַסע קען רעדוצירן דעם אינהאַלט פון פענאָליק קאַמפּאַונדז אין אים מיט ביז 45%.
פענאָלישע קאַמפּאַונדז האָבן געוויזן זיך צו האָבן אייגנשאַפטן ווי פריי ראַדיקאַל סקאַווענדזשינג, סינגלעט זויערשטאָף רעדוקציע און קווענטשינג, הידראָגען אַטאָם אַריבערפירן, און עלעקטראָן דאָנאַציע צו פריי ראַדיקאַלן, מאַכנדיג זיי שטאַרקע אַנטיאַקסאַדאַנץ.⁷⁴דעריבער, אין דעם שטודיע, זענען DPPH און FRAP-באזירטע מעטאָדן גענוצט געוואָרן צו אָפּשאַצן דעם ווירקונג פון לאַקאַסע אויף דער אַנטיאַקסאַדאַנט טעטיקייט פון עפּל זאַפט וואָס איז געהאַלטן געוואָרן אין אַ פרידזשידער פֿאַר 14 טעג (טאַבעלע 2). ביידע מעטאָדן האָבן געוויזן אַ פאַרגרעסערונג אין אַנטיאַקסאַדאַנט טעטיקייט בעת סטאָרידזש, וואָס קען זיין רעכט צו דער פאַרגרעסערונג אין פרייע פענאָליק קאַמפּאַונדז אָדער די פאָרמירונג פון מיילאַרד רעאַקציע פּראָדוקטן (MRPs), מיט מיילאַרד רעאַקציע פּראָדוקטן מסתּמא זייענדיק די סיבה פון דער פאַרגרעסערונג אין אַנטיאַקסאַדאַנט טעטיקייט.⁷⁵נישט-ענזימאַטישע ברוינונג רעאַקציעס (אַרייַנגערעכנט אַסקאָרביק זויער דעגראַדאַציע, מיילאַרד רעאַקציעס, און זויער-קאַטאַליזירטע דעגראַדאַציע פון ​​צוקערס) פּראָדוצירן ברוינע פּיגמענטן (מעלאַנאָידינס). צווישן-אַסקאָרביק זויער דעגראַדאַציע פּראָדוקטן און צוקער דעגראַדאַציע פּראָדוקטן (אַזאַ ווי קאַרבאָניל קאַמפּאַונדז) קענען רעאַגירן מיט אַמינאָ זויערן דורך מיילאַרד רעאַקציעס.⁷⁶כאָטש די ברוינונג פון פרוכטן און גרינסן בעת ​​סטאָרידזש איז שוין ברייט שטודירט געוואָרן, בלייבט אונדזער פארשטאנד פון די רעאַקציעס באגרענעצט.⁷⁷קאַמפּערד מיט דער FRAP מעטאָדע, האָט לאַקאַסע-באַהאַנדלטער עפּל זאַפט געוויזן באַדייטנד נידעריקער אַנטיאַקסאַדאַנט טעטיקייט דורך דער DPPH מעטאָדע (טאַבעלע 2), און די אַנטיאַקסאַדאַנט טעטיקייט פון אַלע מוסטערן איז באַדייטנד געוואַקסן מיט דער פאַרגרעסערונג פון סטאָרידזש צייט. צוויי פאַרשידענע מעטאָדן פֿאַר באַשטימען אַנטיאַקסאַדאַנט טעטיקייט זענען געניצט געוואָרן אין דעם לערנען ווייל זייערע פּרינציפּן זענען אַנדערש. דער DPPH מעטאָדע מעסט די פיייקייט צו נויטראַליזירן פרייע ראַדיקאַלן, בשעת דער FRAP מעטאָדע מעסט די פיייקייט צו רעדוצירן אייַזן יאָנען. דעריבער, איז רעקאָמענדירט צו נוצן קייפל מעטאָדן פֿאַר באַשטימען אַנטיאַקסאַדאַנט טעטיקייט צו בעסער פֿאַרשטיין די אַנטיאַקסאַדאַנט טעטיקייט פון די מוסטערן וואָס זענען געוואָרן שטודירט.⁷⁸
איינע פון ​​די שליסל רעזולטאטן פון דעם שטודיע איז אז *Pleurotus ostreatus* לאַקאַסע NRC 620 ווייזט אָפּטימאַלע טעטיקייט ביי 70°C און pH 3.0. קאַמפּערד מיט אנדערע פונגאַל לאַקאַסעס וואָס ווערן אָפט געניצט פֿאַר זאַפט קלעריפיקאַציע, אַזאַ ווי *Trametes versicolor* און *Ganoderma lucidum* לאַקאַסעס, *P. ostreatus* NRC 620 ווייזט העכערע טערמישע פעסטקייט און אַ מער זויער pH. לאַקאַסעס פון *Trametes versicolor* און *Ganoderma lucidum* ווייַזן טיפּיש אָפּטימאַלע טעטיקייט אין די קייט פון 50-60°C און ביי pH ווערטן צווישן 3.5 און 5.0. דער חילוק קען ביישטייערן צו פֿאַרבעסערטע זאַפט קלעריפיקאַציע עפעקטיווקייט, ספּעציעל פֿאַר זויערע זאַפטן וווּ פעסטקייט ביי נידעריקער pH ווערטן איז קריטיש. די יינציקע כאַראַקטעריסטיק פון *P. קאַמפּערד צו אנדערע שטודירטע פונגאַל לאַקאַסעס, *Pleurotus ostreatus* NRC 620 ווייזט די פיייקייט צו פונקציאָנירן עפעקטיוו אונטער מער טשאַלאַנדזשינג באדינגונגען. איר העכערע אָפּטימאַלע טעטיקייט טעמפּעראַטור סאַגדזשעסטיד פּאָטענציעלע אַדוואַנטאַגעס אין אינדוסטריעלע אַפּלאַקיישאַנז, אַזאַ ווי שנעלער רעאַקציע ראַטעס און רידוסט מיקראָביאַל קאַנטאַמאַניישאַן. איר נידעריק pH, וואָס איז גוט פּאַסיק פֿאַר די זויער נאַטור פון פילע זאַפטן, קען זיין נוציק אין זאַפט קלעריפיקאַטיאָן פּראַסעסאַז. די רעזולטאַטן רעכטפארטיקן ווייטערדיקע ויספאָרשונג פֿאַר גרויס-וואָג אַפּלאַקיישאַן, מאכן *Pleurotus ostreatus* NRC 620 אַ ווייאַבאַל אָלטערנאַטיוו צו טראדיציאנעלן פונגאַל לאַקאַסע קוואלן. קאַמפּערד צו פריערדיקע שטודיעס, מיר געפֿונען אַז די אָפּטימאַל טעמפּעראַטור איז 60°C און די אָפּטימאַל pH איז 3.0. נאָך רעאַקציע ביי 60°C פֿאַר 80 מינוט, *Ganoderma lucidum* לאַקאַסע ריטענדיד.⁴⁶% פון איר טעטיקייט.79 לויט קורניאַוואַטי און ניקעל⁸⁰, *Ganoderma lucidum* ענזימען ווייזן אן אויסגעצייכנטע ביז מיטעלע סטאביליטעט ביי 25°C און pH ווערטן פון 5.0 ביז 8.0, און סטאביליטעט ביי pH 6.0 און טעמפעראטורן פון 10 ביז 30°C. אין דעם שטודיע, האבן מיר געפונען אז די אפטימאלע pH און טעמפעראטור פאר ענזיים אקטיוויטעט פאר *Pleurotus ostreatus* זענען געווען 3.0 און 70°C, בהתאמה. נאך אינקובאציע ביי 40°C און 50°C פאר צוויי שעה, האט דער ענזיים צוריקגעהאלטן 68.33% און 59.61% פון זיין אקטיוויטעט, בהתאמה. דערצו, האט Pleurotus ostreatus NRC 620 לאַקאַסע אויסגעוויזן הויכע אקטיוויטעט איבער א ברייטן טעמפעראטור קייט פון 50°C ביז 80°C, כמעט דערגרייכנדיג מאקסימום אקטיוויטעט (69%–98%), מיט מאקסימום אקטיוויטעט באמערקט ביי 70°C.
אין מסקנא, אויסטער שוואָם לאַקאַסע NRC620, באַקומען אונטער סטאַטישע באדינגונגען, האָט געוויזן אָפּטימאַלע טעטיקייט און פעסטקייט איבער אַ קייט פון pH און טעמפּעראַטור באדינגונגען, דעמאָנסטרירנדיק העכערע פעסטקייט קאַמפּערד צו אַנדערע ענזיים קוועלער. די צוגאב פון 10 mM MgSO₄ און CuSO₄ האָט געוואקסן ענזיים טעטיקייט מיט בעערעך 21% און 35%, ריספּעקטיוולי. ווען פּראַסעסט אין עפּל זאַפט, האָט דער ענזיים רידוסט pH און וויסקאָסיטי, בשעת דער פענאָליק אינהאַלט איז בלויז אַ ביסל דיקריסט בעשאַס סטאָרידזש.
די רעזולטאַטן באַשטעטיקן דעם פּאָטענציאַל פֿון לאַקאַסע אין דער עסן אינדוסטריע, באַזונדערס אין געטראַנק קלעריפיקאַציע. דורך ספּעציפֿיש צעברעכן פֿענאָלישע קאַמפּאַונדז, לאַקאַסע ניט בלויז רעדוצירט טרובעקייט און פֿאַרבעסערט קלעריטי, אָבער אויך האַלט די קוואַליטעט פֿון פֿרוכט זאַפטן אונטער מילדע אָפּערייטינג באדינגונגען. ניט ווי טראַדיציאָנעלע קלעריפיקאַציע אַגענטן ווי דזשעלאַטין, בענטאָניט, און סיליקאַ געל, לאַקאַסע דזשענערירט ניט קיין אָפּפֿאַל אָדער אַראָפּנעמט אָנגענעמע אַראָמאַס פֿון געטראַנקען, מאַכנדיג עס אַ מער ענווייראָנמענטאַלי פרייַנדלעך און סאַסטיינאַבאַל אָפּציע. דערצו, קאַמפּערד צו אנדערע ענזימען און פֿילטראַציע מעטהאָדס, אָפפערט לאַקאַסע אַ טאַרגעטעד און קאָסטן-עפֿעקטיווע לייזונג אָן קאָמפּראָמיס פּראָדוקט קוואַליטעט.
קיאָמוהימבאָ, ה.ד. און ברינק, ה.ג. אַפּליקאַציעס און ימאָוביליזאַציע סטראַטעגיעס פון קופּער-האַלטיקע לאַקאַסעס; אַ רעצענזיע. העליאָן 9, e13156 (2023).